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Contexte L’immunopathogénèse du syndrome inflammatoire paradoxal associé à la tuberculose TB-IRIS reste incertaine Nous avons déterminé l’association entre les réponses spécifiques des lymphocytes T pathogènes et le développement de la TB-IRIS paradoxale sur la thérapie antirétrovirale ARTMethods Cette étude a été intégrée dans une étude de cohorte prospective. Les patients infectés par le VIH atteints de tuberculose pulmonaire active et de numération CD initiale ≤ cellules / μL déclenchant une activation immunitaire des lymphocytes T CD, HLA-DR et PD- expression, phénotype et réponses immunitaires cellulaires spécifiques des pathogènes polyfonctionnels avant et après des semaines de traitement antirétroviral Les patients atteints de TB-IRIS ont été comparés à des témoins non-IRIS en utilisant des tests de rank et de rang et de régression logistique. Résultats Les patients TB-IRIS et les témoins présentaient des comptes de CD similaires, des niveaux d’activation immunitaire associés aux lymphocytes T des sous-ensembles de la mémoire des lymphocytes T et des fréquences de l’interféron gamma IFN-γ / interleukine IL- / nécrose tumorale Après l’initiation du TARV, l’activation immunitaire cellulaire et les sous-populations de lymphocytes T étaient également similaires chez les patients TB-IRIS et les témoins En revanche, les patients TB-IRIS présentaient des augmentations précoces significativement plus rapides de la fréquence des cellules T CDF IFN-γ / IL- / TNF-α polyfonctionnelles spécifiques de la tuberculose sous ART P =; Chaque augmentation de quartile du pourcentage de ces cellules a été associée indépendamment à un risque accru de TB-IRIS% intervalle de confiance, à -fold Dans une analyse secondaire, les patients avec TB-IRIS ont augmenté rapidement et concomitamment Les niveaux d’IL ont tendance à diminuer sur les clonages ARTC. Une expansion rapide des réponses des lymphocytes T CD polyfonctionnels spécifiques de la tuberculose, probablement liée à l’augmentation de l’IL-, est associée. avec le développement de TB-IRIS paradoxal

VIH, tuberculose, reconstitution immunitaire syndrome inflammatoire IRIS, ART, fonction immunitaire cellulaire Initier la thérapie antirétrovirale ART précoce au cours du traitement de la tuberculose chez les patients présentant un virus de l’immunodéficience humaine avancée Le VIH / la tuberculose est associé à une amélioration de la survie ; cependant, cette stratégie augmente également le risque d’aggravation des symptômes de la tuberculose dans un état connu sous le nom de syndrome inflammatoire paradoxal associé à la tuberculose-reconstitution inflammatoire TB-IRIS L’incidence de TB-IRIS varie entre% et% et la morbidité associée peut être significatif Avec l’Organisation mondiale de la santé préconisant un traitement antituberculeux précoce chez les patients co-infectés par le VIH / tuberculose hautement immunosupprimés , l’incidence de la TB-IRIS augmentera probablement Immunologiquement, des niveaux pré-ART plus élevés d’activation immunitaire et une augmentation rapide des cellules productrices d’IFN-γ de l’interféron gamma spécifiques de la tuberculose après l’initiation du TAR chez les adultes infectés par le VIH a été associée au développement de TB-IRIS [, -]. Cependant, plusieurs études récentes ont montré que chez les patients TB-IRIS par rapport aux contrôles , et de nombreux rapports ont indiqué que les patients sans TB-IRIS peuvent également avoir de fortes augmentations des niveaux de pathogènes. Les données existantes ne permettent donc pas de déterminer si des niveaux plus élevés d’activation pré-TARV prédisposent à TB-IRIS et si les lymphocytes T spécifiques à la tuberculose sont impliqués dans la pathogenèse TB-IRIS. la récupération immunitaire sur ART à TB-IRIS s’est principalement concentrée sur les réponses IFN-γ seules [,,]; Cependant, plusieurs cytokines, dont l’interleukine IL- et le facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α, impliquées dans la prolifération des lymphocytes T et la protection de l’hôte dans la tuberculose, peuvent également être associées à la TB-IRIS . Des augmentations des cytokines pro-inflammatoires telles que l’interleukine IL-on ART ont également été relativement impliquées dans la pathogenèse de TB-IRIS Pour évaluer ces problèmes, nous avons testé l’hypothèse que TB-IRIS est associée à une récupération robuste de la tuberculose polyfonctionnelle. Nous avons également comparé les niveaux d’activation immunitaire des lymphocytes T et les sous-ensembles de mémoire entre les patients IRIS et les témoins.

Méthodes

Déclaration d’éthique

Les commissions d’examen institutionnel de l’Université de Pennsylvanie, du Ministère de la Santé du Botswana et de l’Hôpital Princess Marina de Gaborone, au Botswana, ont approuvé cette étude.

Étudier le design

Cette étude a été menée dans le cadre d’une étude de cohorte prospective sur la relation entre la récupération immunitaire précoce et la mortalité précoce . Nous avons étudié la relation entre le phénotype cellulaire et la fonction au début et à la semaine du TAR et le développement du TB-IRIS paradoxal. dans les premiers mois de TAR

Participants à l’étude

Les patients ont été recrutés dans les cliniques publiques externes et le principal hôpital public de Gaborone, au Botswana, de novembre à juillet, comme décrit ailleurs Les participants devaient être séropositifs, antirétroviraux et antirétroviraux. Les femmes enceintes, celles sous immunomodulateurs et celles avec tuberculose résistante aux médicaments ont été exclues [,,] Pour l’analyse primaire, les patients devaient disposer de données cliniques et de PBMC de cellules mononucléées du sang périphérique à partir du début et / ou de la semaine suivant l’initiation du TAR Une analyse secondaire a étudié l’association entre le taux de CD et le TB-IRIS à long terme. la cohorte qui avait au moins un nombre de CD mesuré à et / ou mois après le début du TAR, indépendamment de la disponibilité des PBMC

Collecte de données

Les données cliniques ont été recueillies au départ et mensuellement pendant des mois après le dénombrement des CD d’initiation, la charge d’ARN du VIH et les PBMC ont été obtenues au début et à la semaine suivant le début du TAR . soins cliniques Un réseau international modifié pour l’étude de la définition d’IRIS associée au VIH a été utilisé pour statuer rétrospectivement sur le TB-IRIS Tous les cas répondaient également à la définition d’IRIS du AIDS Clinical Trials Group

Préparation et stimulation des PBMC

Gemini cryoconservés ont été décongelés dans du milieu RPMI Gibco contenant% de sérum bovin fœtal Gemini Bio-Products, m-l-glutamine Gibco, U / ml de pénicilline et streptomycine Gibco et DNase pg / ml, PBMC Sigma-Aldrich reposées pendant une nuit à ° C en% de dioxyde de carbone Quand & lt; des millions de PBMC étaient disponibles, seule la coloration de surface pour le phénotypage des lymphocytes T a été effectuée. Si un patient avait ≥ millions de PBMC, des millions de cellules ont été stimulées avec anti-CD eBioscience à un contrôle positif de μg / mL; Consensus sur le VIH C pool de peptides Gag National Institutes of Health Réactifs de recherche et de référence sur le SIDA Programme à μg / peptide / mL pour les réponses spécifiques au VIH; dérivé protéique purifié PPD; Statens Serum Institute à μg / mL pour mesurer la réponse spécifique à la tuberculose; et milieu seul contrôle négatif Toutes les réactions ont été co-stimulées avec CD / CDd BD FastImmune Après des heures de stimulation, monensin et brefeldin A BD Biosciences ont été ajoutés et incubés pendant des heures supplémentaires à ° C en% de dioxyde de carbone.

Cytométrie en flux

Des panneaux d’écoulement multicolores ont été utilisés pour définir le phénotype et la fonction des lymphocytes T Tableau supplémentaire Live / DEAD aqua fixable Life Technologies a été utilisé pour l’exclusion des cellules mortes Anti-CD-BV Biolegend, anti-CD-Qdot QD ou anti-CD -QD Life Technologies ont été utilisés pour identifier des lymphocytes T CD et CD Les sous-ensembles de lymphocytes T mémoire ont été déterminés en utilisant Beckman Coulter anti-CDRO-PE-Texas-Red, anti-CCR-APC-eFluro eBioscience, et anti-CD-BV Biolegend L’activation des lymphocytes T a été déterminée avec anti-CD-PE-Cy Biolegend, anti-HLA-DR-BV ou FITC Biolegend, BD Biosciences, et la coloration des cytokines intracellulaires anti-PD-APC-Cy Biolegend a été réalisée avec anti-IFN-γ. Biologiegend bleue, anti-IL-AF Biolegend, et anti-TNF-α-AF Les cellules colorées par eBioscience ont été acquises sur LSR II BD Biosciences Les données de cytométrie en flux ont été analysées en utilisant la version FlowJo TreeStar, la version Pestle et la version SPICE Pour déterminer les niveaux de cytokines intracellulaires spécifiques de l’antigène, la fréquence des cellules productrices de cytokines dans le négati Le contrôle ve a été soustrait des réponses stimulées par l’antigène. La sélection booléenne a été utilisée pour déterminer la fréquence des sous-ensembles de lymphocytes T contenant de l’IFN-y, de l’IL- et / ou du TNF-a polyfonctionnels et monofonctionnels.

Analyses statistiques

Dans l’analyse primaire, les patients TB-IRIS ont été comparés aux patients qui ont survécu sans témoins TB-IRIS. Les participants décédés sans IRIS ont été inclus comme témoins dans une analyse de sensibilité de la relation primaire entre récupération immunitaire polyfonctionnelle et IRIS. en utilisant les tests de la somme de Wilcoxon et χ, respectivement Tous les tests ont été effectués et un P & lt; a été considéré statistiquement significatif Des cellules avec une viabilité de & gt;% ont été utilisées dans l’analyse; la viabilité médiane des PBMC était de% intervalle interquartile [IQR],% -% et ne différait pas entre les patients IRIS et les témoins Facteurs cliniques associés à TB-IRIS avec un P & lt; dans les analyses univariées ont été considérés comme des facteurs de confusion potentiels dans l’analyse de régression logistique multivariée évaluant l’association entre les changements dans les réponses des lymphocytes T polyfonctionnels stratifiés en quartiles et TB-IRIS Facteurs qui ont changé le rapport de cotes non ajusté En outre, pour évaluer l’hypothèse plus large que TB-IRIS est associée à une meilleure récupération immunitaire sur ART, une analyse secondaire a utilisé un modèle GEE d’équation d’estimation généralisée avec une structure de corrélation indépendante et des estimateurs d’erreur standard robustes pour évaluer l’association Les taux de TB-IRIS et de CD sur le traitement antirétroviral pendant les mois de suivi, y compris tous les numérations CD disponibles et l’ajustement pour les facteurs de confusion potentiels En outre, certains patients témoins ont un rétablissement rapide de la fonction des lymphocytes T spécifiques à la tuberculose. ne pas progresser vers IRIS Dans une analyse exploratoire, nous avons testé l’hypothèse sis que les augmentations des niveaux d’IL, qui ont été associées à IRIS [,,,], seraient moins chez les patients témoins qui avaient également une récupération rapide de la fonction immunitaire cellulaire par rapport aux patients TB-IRIS utilisant des concentrations IL- déterminées auparavant Tests de la somme des rangs Dans cette analyse, les contrôles étaient limités à ceux décrits dans cette étude qui présentaient des augmentations à la semaine de traitement antirétroviral supérieures à la médiane globale du groupe pour les lymphocytes T CD IFN-γ / IL- / TNF-α, cellule CD dénombrements et réponses IFN-γ spécifiques de la tuberculose par ELISpot enzymatique lié à l’enzyme Etant donné l’hypothèse focalisée de l’analyse primaire reliant la récupération des lymphocytes T spécifiques de l’antigène à TB-IRIS, ajustement pour des comparaisons multiples dans les analyses exploratoires et secondaires n’a pas été effectuée StataCorp, College Station, Texas a été utilisé pour les analyses La version de GraphPad Prism San Diego, Californie et SPICE ont été utilisées pour générer des graphiques

RÉSULTATS

Caractéristiques de base des patients

Parmi les patients inclus dans l’étude parente,% ont commencé un TAR et avaient des données cliniques de base disponibles pour l’analyse Parmi ces patients,% présentaient des PBMC au départ et / ou à la semaine après l’ART pour l’analyse par cytométrie de flux. étaient inclus dans l’analyse étaient similaires en ce qui concerne l’âge, le sexe, et le nombre de CD de base comme ceux qui ont été inclus données non montrées Parmi les patients,% ont connu TB-IRIS,% étaient contrôles non-IRIS, et% sont morts, dont ont été inclus comme contrôles dans les analyses de sensibilité Comme décrit précédemment, le patient qui avait TB-IRIS est décédé, bien que ses symptômes IRIS résolus avant le décès Elle a été considérée comme un cas TB-IRIS dans l’analyse TB-IRIS patients et contrôles étaient similaires du nombre de CD pré-TAR et de la durée entre le traitement antituberculeux et le traitement antirétroviral P & gt; ; Tableau Les patients TB-IRIS étaient plus susceptibles d’avoir commencé un traitement antirétroviral contenant de la névirapine P = et semblaient moins susceptibles d’avoir un indice de masse corporelle & lt; kg / m comparé aux témoins P = symptômes associés à IRIS, décrits précédemment , étaient généralement légers et une aggravation des symptômes respiratoires survenant à une médiane de semaines après l’initiation du TAR IQR, – semaines À la semaine post-ART, patients TB-IRIS et les contrôles ont eu des gains similaires dans le nombre de CD et les taux de suppression virologique Tableau supplémentaire

Tableau Caractéristiques de base associées au syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associé à la tuberculose chez les patients présentant un virus d’immunodéficience humaine avancée / tuberculose Coïncidence Initiation de la thérapie antirétrovirale Contrôles caractéristiques n = TB-IRISa n = P Valeur Sexe féminin, non% Âge, y, gamme moyenne – – ATT à l’intervalle d’initiation du TAR, d, médiane IQR – – charge d’ARN du VIH à la ligne de base, copies de journal / mL, IQR médian; Non -; -; Nombre de cellules T CD au départ, cellules / μL, médiane IQR – – NVP-based ART, No% AFB tuberculose à frottis négatif, No% Présence de TB extrapulmonaire au départ, No% Présence d’OI non-TB au départ, No % IMC, kg / m, IQR médian; Non -; -; IMC, non & lt; kg / m%; Non ; ; Hémoglobine, g / dL, médiane IQR; Non -; -: Caractéristique Contrôles n = TB-IRISa n = P Valeur Sexe féminin, Non% Âge, y, intervalle moyen – – ATT à l’intervalle d’initiation ART, d, médiane IQR – – Charge VIH VIH à l’inclusion, log copies / mL, médiane IQR; Non -; -; Nombre de cellules T CD au départ, cellules / μL, médiane IQR – – NVP-based ART, No% AFB tuberculose à frottis négatif, No% Présence de TB extrapulmonaire au départ, No% Présence d’OI non-TB au départ, No % IMC, kg / m, IQR médian; Non -; -; IMC, non & lt; kg / m%; Non ; ; Hémoglobine, g / dL, médiane IQR; Non -; -: Les valeurs de P indiquées comparent les contrôles aux patients TB-IRIS par le test de Wilcoxon pour les variables continues et χ test pour les variables catégorielles. Abréviations: AFB, bacilles acido-alcoolo-résistants; ART, thérapie antirétrovirale; ATT, traitement antituberculeux; IMC, indice de masse corporelle; VIH, virus de l’immunodéficience humaine; IQR, intervalle interquartile; IRIS, syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire; NVP, névirapine; OI, infection opportuniste; Tuberculose, tuberculose Indique le nombre de témoins non survivants d’IRIS et de patients TB-IRIS ayant subi une analyse de cytométrie de flux au début et / ou à la semaine suivant l’initiation du TARVView Large

Activations immunitaires cellulaires et sous-ensembles de lymphocytes T

Les patients TB-IRIS et les témoins présentaient des niveaux comparables de lymphocytes T exprimant CD, HLA-DR et PD-, avant et après l’initiation du TARV Tableau En outre, les patients TB-IRIS et les témoins étaient similaires en ce qui concerne la fréquence de la mémoire Sous-ensembles de lymphocytes T aux deux points temporels, à l’exception des patients TB-IRIS ayant des fréquences pré-ART significativement plus élevées que les témoins P =; Figure supplémentaire

Tableau CD, Antigène Leucocyte-DR, et PD- Expression sur CD-CD et CD T-Cellules et Association avec Syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose chez les patients atteints de virus d’immunodéficience humaine avancée / Tuberculose Coinfection initiant la thérapie antirétrovirale Contrôle d’activation immunitaire cellulaire TB-IRIS P Valeur Baseline CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD PD- -; -; CD PD- -; -; Passer du CD CD / DR de base à -; – à; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- – – à -; – – à -; CD CD / DR – – à; – – à; CD CD- / DR -; – à; CD CD / DR- – – à -; – – à; CD PD- – à; – à; CD PD- – – à; – – à; Semaine post-ART CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD PD- -; -; CD PD- -; -; Contrôle d’activation immunitaire cellulaire TB-IRIS P Valeur CD de base CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD PD- -; -; CD PD- -; -; Passer du CD CD / DR de base à -; – à; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- – – à -; – – à -; CD CD / DR – – à; – – à; CD CD- / DR -; – à; CD CD / DR- – – à -; – – à; CD PD- – à; – à; CD PD- – – à; – – à; Semaine post-ART CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD CD / DR -; -; CD CD- / DR -; -; CD CD / DR- -; -; CD PD- -; -; CD PD- -; -; Les données sont présentées comme intervalle interquartile médian et No: fréquence médiane des CD et / ou HLA-DR et PD exprimant les cellules T CD et CD pré-ART, changement par rapport aux valeurs initiales, et à la semaine post-ART; Les patients TB-IRIS évalués à chaque moment et ceux qui ont apparié les données pour déterminer le changement par rapport aux valeurs de P de base montrées comparent les contrôles aux patients TB-IRIS par les tests d’abrégés de Wilcoxon: ART, thérapie antirétrovirale; HLA-DR, antigène leucocytaire humain-DRView Large

Réponses immunitaires cellulaires spécifiques à la tuberculose

Un sous-ensemble de TB-IRIS n = patients et témoins n = avait des PBMC disponibles pour la coloration des cytokines intracellulaires suite à la stimulation antigénique au départ et / ou semaine après l’initiation du TAR Les caractéristiques cliniques de ces témoins et des patients TB-IRIS étaient similaires à celles décrites dans le tableau Avant l’initiation du traitement antirétroviral, les patients TB-IRIS avaient tendance à avoir des fréquences médianes plus élevées de lymphocytes T CDF IFN-γ / IL- / TNF-α polyfonctionnels spécifiques de la tuberculose que les témoins; Cependant, ces différences n’étaient pas statistiquement significatives. Figure A Après le traitement antirétroviral, les patients TB-IRIS présentaient des augmentations significativement plus élevées de la ligne de base à la semaine de la fréquence des lymphocytes T CD spécifiques de la tuberculose exprimant IFN-γ / IL- / TNF-α ; Figure Dans le même ordre d’idées, les fréquences des lymphocytes T CDT IFN-γ / IL- / TNF-α et IFN-γ- / IL- / TNF-α spécifiques de la tuberculose étaient plus élevées chez les patients TB-IRIS que chez les témoins à la semaine post-ART. et P =, respectivement; Figure A Après avoir ajusté l’utilisation du traitement antirétroviral à base de névirapine et de l’indice de masse corporelle, chaque augmentation quartile des lymphocytes T CDT IFN-γ / IL- / TNF-α spécifiques à la tuberculose entre le début et la fin de la TAR a été associée fold Intervalle de confiance% [CI], pour multiplier les chances de TB-IRIS Table Cette association n’a pas été affectée par l’ajustement pour les numérations pré-ART et était encore plus forte lorsque les lymphocytes T polyfonctionnels ont été évalués. Notamment, les associations entre TB-IRIS et les cytokines associées aux lymphocytes T CD spécifiques à la tuberculose, évaluées à la semaine ou comme changement de la ligne de base à la semaine, ont été observés non seulement pour l’IFN-γ, mais aussi pour l’IL- et le TNF-α, lorsqu’ils ont été évalués en tant qu’expression totale des cytokines. Figure supplémentaire Les réponses immunitaires spécifiques du VIH ne différaient pas entre les groupes Figure supplémentaire

Tableau Modèle de Régression Logistique Évaluation de la Relation entre la Réponse Polyfonctionnelle et le Syndrome Immunodépendant de Reconstitution Immunitaire Associée à la Tuberculose chez les Patients Atteints de Virus d’Immunodéficience Humaine Avancée / Tuberculose Initiation de la Thérapie Antirétrovirale T CD IFN-γ / IL- / TNF-α Non Ajustée OR% CI Ajusté OU% IC Baseline – – Modification par rapport à la valeur de référence -a -a Semaine post-ART -a -a spécifique à la TB IFN-γ / IL- / TNF-α CD T-cellules Non ajusté OU% CI ajusté OU% CI Baseline – – Changement par rapport aux valeurs initiales -a -a Semaine post-ART -a -a Base de référence n =, changement par rapport à la ligne de base n =, et semaine après initiation ART n = fréquences de l’IFN-γ / IL- / TNF-α polyfonctionnel CD T- la réponse cellulaire à la stimulation des dérivés protéiques purifiés à partir des analyses non ajustées montrées aux Figures A,, et A ont été stratifiées en quartiles et évaluées pour l’association avec le syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associé à la tuberculose TB-IRIS dans un modèle de régression logistique Les fréquences médianes des lymphocytes T CD polyfonctionnels correspondant à chaque quartile sont détaillées dans le tableau supplémentaire du tableau montre les OR et% IC pour TB-IRIS pour chaque augmentation quartile des IFN-γ / IL- / TNF-α polyfonctionnels CD T- cellules Pour les analyses ajustées, le TAR basé sur la névirapine, l’indice de masse corporelle et le nombre de CD pré-TAR ont été inclus dans le modèle. Abréviations: ART, traitement antirétroviral; CI, intervalle de confiance; IFN-y, interféron gamma; IL-, interleukine; OU, odds ratio; Tuberculose, tuberculose; TNF-α, facteur de nécrose tumorale alphaa Indique une association indépendante entre la réponse des lymphocytes T CD spécifiques de la tuberculose polyfonctionnelle et TB-IRISView Large

Figure Vue largeTéléchargement Patients atteints du syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose TB-IRIS avait tendance à présenter des taux élevés de lymphocytes T spécifiques à la TB exprimant plusieurs cytokines avant la thérapie antirétrovirale Traitement antirétroviral initiation Les mononucléaires sanguins périphériques des patients obtenus avant l’initiation du traitement antirétroviral étaient stimulés Fréquence des cellules T CD spécifiques à la TB exprimant l’IFN-γ de l’interféron gamma, l’interleukine IL- et / ou le facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α au niveau de la protéine PPD purifiée. A, Bargraphe montre la fréquence médiane et la gamme interquartile des combinaisons possibles d’expression d’IFN-γ, IL-, et TNF-α par les cellules T CD en réponse à PPD stimulation, chez les témoins et les patients TB-IRIS B, diagrammes à secteurs montrent la contribution de chaque combinaison de réponse cytokine au total réponses médiées par les lymphocytes T CD chez les témoins et les patients TB-IRIS Les couleurs dans les diagrammes à secteurs correspondent au bas du graphique à barres, avec des arcs de tarte indiquant la contribution de IFN-γ, IL- et TNF-α au poly, et les réponses monofonctionnelles chez les témoins survivants non-IRIS et chez les patients TB-IRIS Les données présentées sont la soustraction suivante des réponses de fond correspondantes eczéma. Les valeurs de P étaient & gt; Patients présentant un syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose TB-IRIS avait tendance à présenter des taux élevés de lymphocytes T CD spécifiques à la TB exprimant plusieurs cytokines avant la thérapie antirétrovirale. Les cellules mononucléées du sang périphérique des patients obtenus avant l’initiation du TAR ont été stimulées avec PPD purifié pour mesurer les réponses spécifiques à la TB suivies par la cytokine intracellulaire et la cytométrie de flux. Fréquences des lymphocytes T CD spécifiques exprimant l’interféron gamma IFN-γ, interleukine IL -, et / ou facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α au départ chez les témoins n = vs patients TB-IRIS n = ont été comparés A, Bargraphe montre la fréquence médiane et la gamme interquartile des combinaisons possibles de IFN-γ, IL- et Expression du TNF-α par les cellules T CD en réponse à la stimulation PPD chez les témoins et les patients TB-IRIS B, Diagrammes à secteurs montrant la contribution de chaque Combinaison de la réponse cytokine aux réponses totales TB-spécifiques médiées par les lymphocytes T CD chez les témoins et les patients TB-IRIS Les couleurs dans les diagrammes à secteurs correspondent au bas du graphique à barres, avec des arcs de tarte indiquant la contribution de IFN-γ, IL -, et TNF-α aux réponses poly, et mono-fonctionnelles chez les témoins survivants non-IRIS et chez les patients TB-IRIS Les données montrées sont la soustraction suivante des réponses de fond correspondantes. Les valeurs P étaient & gt; pour toutes les comparaisons montrées en A et B par les tests de Wilcoxon

Figure Vue largeTélécharger les patients atteints du syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose TB-IRIS ont une augmentation plus importante des lymphocytes T CD spécifiques polyfonctionnels de la thérapie de base à la semaine post-antirétrovirale Initiation au traitement antirétroviral comparé aux contrôles Cellules mononucléaires du sang périphérique des patients L’initiation de l’ART et l’initiation post-ART ont été stimulées avec la PPD purifiée pour mesurer les réponses spécifiques à la tuberculose suivies par la cytokine intracellulaire et la cytométrie de flux. Changement de l’initiation de la TAR à la fréquence des lymphocytes T CD spécifiques à la TB exprimant interféron gamma IFN-γ, interleukine IL-, et / ou facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α chez les témoins n = vs patients TB-IRIS n = avec données appariées a été déterminée Modification de la fréquence des combinaisons possibles d’IFN-γ, L’expression de l’IL- et du TNF-α par les cellules T CD après la stimulation de la PPD chez les témoins et les patients TB-IRIS est représentée les lignes indiquent la fréquence médiane avec la gamme interquartile Les tests de la somme de Wilcoxon ont été utilisés pour déterminer les valeurs de PVoir la grande diapositiveTélécharger les patients atteints du syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose TB-IRIS ont une plus grande augmentation des lymphocytes T CD spécifiques polyfonctionnels de la ligne de base à la semaine Initiation au traitement antirétroviral Comparaison aux contrôles Les cellules mononucléées du sang périphérique des patients obtenues avant l’initiation du TAR et l’initiation post-ART ont été stimulées avec la PPD purifiée pour mesurer les réponses spécifiques à la TB suivies par la cytokine intracellulaire et la cytométrie en flux. début de traitement post-ART dans la fréquence des lymphocytes T CD spécifiques de la TB exprimant l’interféron gamma IFN-γ, interleukine IL-, et / ou facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α chez les témoins n = vs patients TB-IRIS n = avec paire les données ont été déterminées Changement de la fréquence des combinaisons possibles d’IFN-γ, IL- et Expression du TNF-α par les lymphocytes T CD après la stimulation PPD chez les patients témoins et TB-IRIS Les lignes horizontales indiquent la fréquence médiane avec la gamme interquartile Les tests de la somme des rangs de Wilcoxon ont été utilisés pour déterminer les valeurs P

Figure View largeDownload slideAprès des semaines de thérapie antirétrovirale ART, les patients atteints de syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose TB-IRIS ont augmenté la production de cytokines multiples spécifique à la tuberculose par les lymphocytes T CD par rapport aux contrôles Cellules mononucléaires du sang périphérique des patients Les cellules ont été colorées pour quantifier les réponses des cytokines par cytométrie en flux. La fréquence des lymphocytes T CD spécifiques de la TB exprimant l’interféron gamma IFN-γ, l’interleukine IL- et / ou le facteur de nécrose tumorale A, Le graphique à barres montre la fréquence médiane et la plage interquartile des combinaisons possibles d’IFN-γ, d’IL- et de TNF- spécifiques à la TB-α à la semaine post-ART chez les témoins. Cellules T CD exprimant α chez les témoins et les patients TB-IRIS B, Diagrammes à secteurs montrant la contribution de chaque combinaison de réponses cytokines au total réponses médiées par les cellules T CD chez les témoins et les patients TB-IRIS Les couleurs du graphique à secteurs correspondent aux couleurs de la tranche illustrées en bas du graphique à barres, les arcs en secteurs indiquant la contribution de l’IFN-γ, de l’IL- et du TNF -α aux réponses poly, et mono-fonctionnelles chez les témoins survivants non-IRIS et chez les patients TB-IRIS Les données montrées sont soustraction suivante des réponses de fond correspondantes Wilcoxon tests de somme-rank ont ​​été utilisés pour déterminer les valeurs PFigure View largeDownload slideAfter semaines de thérapie antirétrovirale ART, patients atteints du syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la tuberculose TB-IRIS ont augmenté la production spécifique de cytokines multiples par les lymphocytes T CD par rapport aux contrôles Les cellules mononucléaires du sang périphérique des patients obtenus dans les semaines suivant l’initiation du TAR ont été stimulées avec des dérivés protéiques purifiés. mesure des réponses spécifiques à la TB Les cellules ont été colorées pour quantifier les réponses cytokines par cytométrie en flux. cellules exprimant l’interféron gamma IFN-γ, interleukine IL-, et / ou facteur de nécrose tumorale alpha TNF-α à la semaine post-ART chez les témoins n = vs patients TB-IRIS n = est représenté A, Diagramme à barres montrant la fréquence médiane et la gamme interquartile des combinaisons possibles de cellules T CD exprimant l’IFN-γ, l’IL- et le TNF-α spécifiques à la TB chez les témoins et les patients TB-IRIS B, les camemberts montrent la contribution de chaque combinaison de réponses cytokines au total TB- réponses spécifiques médiées par les lymphocytes T CD chez les témoins et les patients TB-IRIS Les couleurs du graphique à secteurs correspondent aux couleurs des coupes de tarte indiquées au bas du graphique à barres, avec des arcs en secteurs indiquant la contribution de IFN-γ, IL- et TNF-α aux réponses poly, et mono-fonctionnelles chez les témoins survivants non-IRIS et les patients TB-IRIS Les données présentées sont soustraction suivante des réponses de fond correspondantes Wilcoxon tests de la somme des rangs ont été utilisés pour déterminer les valeurs P La récupération des cellules T à la semaine était al dans le modèle GEE, ajusté en fonction du nombre de CD initial, les patients TB-IRIS présentaient un nombre moyen plus élevé de CD sur le TAR. cellules / pL [% CI, – cellules / pL]; P = Nous avons également évalué la relation entre le changement de la fonction immunitaire cellulaire et la réponse immunitaire innée chez l’adulte chez les témoins et les patients TB-IRIS Figure supplémentaire Un nombre important de contrôles a augmenté rapidement l’IFN-γ / IL- / TNF spécifique à la tuberculose -changement médian des lymphocytes T CD,% [IQR,% -%] suivant l’initiation de l’ART qui étaient comparables à ceux chez les patients TB-IRIS variation médiane,% [IQR% -%]; P = Cependant, alors que les patients TB-IRIS présentaient des augmentations précoces du changement IL-median, pg / mL [IQR, – à pg / mL], les contrôles avaient tendance à avoir des concentrations d’IL- qui diminuaient le changement médian, – pg / mL [IQR, – à pg / ml]; P =; Figure A Cette relation est devenue significative lors de l’évaluation de la taille de l’échantillon par évaluation ELISpot, où le changement d’IL médian était significativement plus élevé chez ceux qui ont développé IRIS vs contrôles pg / mL [IQR, – à pg / mL] vs – pg / mL [IQR, – à pg / mL]; P =; Figure B Les changements dans IL-sur ART étaient également plus élevés chez les patients TB-IRIS lorsque les contrôles avec des augmentations rapides du nombre de CD ont été examinés changement médian, pg / mL [IQR, – à pg / mL] vs – pg / mL [IQR, – à pg / ml]; P =; Figure C

Figure View largeTélécharger slide Tuberculose liée T-spécifique des lymphocytes T et réponses immunitaires innées mesurées par l’interleukine systémique IL- caractérisée par un syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la TB TB-IRIS A, témoins non-IRIS avec changement de l’interféron gamma polyfonctionnel spécifique de la TB [IFN -γ] / interleukine [IL -] / facteur de nécrose tumorale alpha [TNF-α] Réponses des lymphocytes T CD après la thérapie antirétrovirale Les antirétroviraux qui étaient supérieurs à la médiane du groupe ont été identifiés chez les patients témoins avec un TB supérieur à la médiane. Les réponses spécifiques d’IFN-γ mesurées antérieurement par ELISpot ELISPOT lié à l’enzyme B, ainsi qu’une augmentation plus élevée que médiane du nombre de CD sur ART C, ont été identifiées. Les changements dans les taux circulants d’IL- entre semaine de référence et post-ART ont été comparés. contrôles avec une réponse immunitaire cellulaire adaptative élevée à tous les patients atteints de TB-IRIS avec des données correspondantes Les barres indiquent un changement médian de la concentration d’IL- avec intervalle interquartile, qui était auparavant quanti Les tests de la somme des rangs de Wilcoxon ont été utilisés pour déterminer les valeurs de PFigure View largeTélécharger slideTuberculose liée à la tuberculose T-spécifique des cellules T et réponses immunitaires innées mesurées par l’interleukine systémique IL- caractérisée par un syndrome inflammatoire de reconstitution immunitaire associée à la TB TB-IRIS A , Contrôles non-IRIS avec modification de l’interféron gamma polyfonctionnel spécifique à la TB [IFN-γ] / interleukine [IL -] / facteur de nécrose tumorale alpha [TNF-α] CD T-réponses post-traitement antirétroviral médiane pour le groupe ont été identifiés chez les patients témoins de contrôle avec des réponses IFN-γ spécifiques médianes au-dessus de la médiane mesurées précédemment par ELISpot enzyme-linked immunospot B, ainsi qu’une augmentation plus élevée que médiane du nombre de CD sur ART C, ont été identifiés On a comparé les changements dans les taux circulants d’IL- de la ligne de base à la semaine post-ART entre les témoins ayant une réponse immunitaire cellulaire adaptative élevée à tous les patients TB-IRIS avec des données correspondantes. Les barres indiquent une médiane changement de la concentration d’IL- avec la gamme interquartile, qui a été précédemment quantifiée par le dosage de Luminex Les tests de la somme des rangs de Wilcoxon ont été utilisés pour déterminer les valeurs de P

DISCUSSION

En particulier, l’évaluation des réponses polyfonctionnelles indique que le développement de TB-IRIS sous ARV peut impliquer plusieurs aspects interdépendants de la récupération du système immunitaire de l’hôte, par exemple, IFN-γ et TNF. -α sont importants dans l’activation des monocytes / macrophages et le recrutement de ces cellules au site d’infection , alors que IL- peut favoriser la prolifération des lymphocytes T en réponse à l’exposition aux antigènes, en particulier lorsqu’ils sont combinés avec IFN-γ et TNF -α Ainsi, une récupération robuste de cellules T CD spécifiques de la tuberculose polyfonctionnelle peut activer simultanément des cellules immunitaires innées et adaptatives, déclenchant une inflammation systémique plus importante que la récupération de cellules moins fonctionnelles. Des études précédentes ont noté que de nombreux patients sans TB-IRIS ont augmentation rapide des réponses immunitaires spécifiques aux pathogènes sur ART, remettant en question le rôle de ces cellules dans le développement du syndrome Our explorato analyse des changements dans les taux d’IL-, qui est systématiquement impliquée dans l’immunopathologie IRIS , chez les témoins non-IRIS qui avaient également besoin d’une confirmation immunitaire rapide, mais suggère que le développement de TB-IRIS peut dépendre de la coordination. récupération de la fonction immunitaire adaptative et innée Nous avons précédemment documenté que le facteur stimulant les colonies de granulocytes et le TNF-α augmentent chez les patients TB-IRIS de cette cohorte, alors que ces biomarqueurs et le facteur de stimulation des colonies de granulocytes macrophages diminuent chez les non-IRIS contrôles Ces facteurs, impliqués dans la maturation et l’activation des monocytes / macrophages, peuvent conduire à une inflammation pathologique en stimulant la présentation de l’antigène tuberculeux dans le cadre de cellules T CD polyfonctionnelles en expansion rapide spécifiques aux pathogènes . les données suggèrent que le lien entre la reconstitution des réponses immunitaires adaptatives et innées après l’initiation du traitement antirétroviral et TB-IRIS devrait être i L’évaluation d’autres cytokines en plus de l’IFN-γ pourrait également éclairer des stratégies thérapeutiques potentielles. Par exemple, TB-IRIS dans notre étude était généralement associée non seulement à des augmentations dans plusieurs sous-groupes de lymphocytes T CD contenant du TNF-α, mais aussi à des augmentations de figures TNF-α dérivées de cellules T CD totales et; Figure supplémentaire et niveaux systémiques de TNF-α , après l’initiation du TAR Ces observations sont en accord avec un rapport incluant des patients TB-IRIS documentant une association entre IRIS et les lymphocytes T CD exprimant à la fois l’IFN-γ et le TNF-α ; avec des rapports de cas documentant des réactions paradoxales chez des patients atteints d’une maladie auto-immune qui développent une tuberculose et arrêtent l’infliximab, un anticorps monoclonal contre le TNF-α ; Des études d’immunothérapies avec des médicaments approuvés ciblant le TNF-α ou des médicaments qui diminuent l’expression du TNF-α devraient être envisagées Nous avons trouvé des preuves minimales pour soutenir l’hypothèse selon laquelle des taux d’activation immunitaire cellulaire pré-TAR plus élevés PD- , HLA-DR et CD risque accru de TB-IRIS subséquent Ces résultats sont similaires à ceux de plusieurs autres études et sont généralement conformes à notre rapport précédent. En outre, nous n’avons trouvé aucun enrichissement dans les lymphocytes T CD de stade de différenciation tardive dans TB-IRIS. Nous avons pu comparer les cas IRIS paradoxaux et non démasqués et les témoins dans le contexte. de temps similaires à l’initiation de l’ART après le diagnostic de la tuberculose, éliminant ainsi un facteur de confusion potentiel majeur associé à des niveaux plus élevés d’activation immunitaire à l’initiation de la TARV [,,,] Nos données c Une explication est que les niveaux inférieurs de marqueurs circulants de l’inflammation systémique pré-TAR chez les patients TB-IRIS par rapport aux témoins de cette cohorte, documentés précédemment , ont peut-être facilité redistribution des lymphocytes T polyfonctionnels et totaux séquestrés du tissu lymphoïde peu après le début de l’ART Bien que l’étude puisse être généralisée à des contextes similaires, les résultats de cette étude ont été limités à des cas relativement modérés de TB-IRIS pulmonaire paradoxale mais peuvent ne pas être généralisables. En outre, un plus grand nombre de patients avec TB-IRIS aurait permis une plus grande puissance pour les comparaisons statistiques Enfin, nous n’avons pas caractérisé la fonction des monocytes pour intégrer des analyses plus complètes En conclusion, augmentation rapide des lymphocytes T polyfonctionnels spécifiques de la tuberculose Initiation de l’ART caractérisée TB-IRIS Les études sur les mécanismes immunitaires de TB-IRIS devraient caractériser plusieurs cytokines pertinentes, et les liens entre la fonction immunitaire adaptative et innée pourraient révéler de nouvelles interventions préventives et thérapeutiques pour ce syndrome.

Remarques

Remerciements Nous remercions le Partenariat du Botswana Harvard AIDS Institute pour avoir fourni un espace de laboratoire pour l’isolement des PBMC au Botswana; les fournisseurs de soins cliniques qui ont aiguillé les patients; et les patients qui se sont portés volontaires pour participer à cette étude. Soutien financier Ce travail a été soutenu par des subventions de la RAI numéro de subvention du National Institutes of Health et le Penn Center for AIDS Research numéro de subvention AIPotential conflits d’intérêts Tous les auteurs: Aucun conflit signalé Tous les auteurs ont soumis le Formulaire ICMJE pour la divulgation des conflits d’intérêts potentiels Les conflits que les éditeurs jugent pertinents pour le contenu du manuscrit ont été divulgués