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Les données sont limitées sur les résultats du traitement avec des céphalosporines à spectre étendu ESCs pour les infections causées par Enterobacteriaceae qui produisent des β-lactamases à spectre étendu ESBLs Cette étude décrit la plus grande expérience de traitement d’une série nonout des infections sanguines causées par des souches d’épisodes Escherichia coli et Klebsiella Les épisodes pneumoniae avec une concentration minimale inhibitrice de ceftazidime de ⩾ μg / mL ont produit une plus grande variété de types de β-lactamases que les isolats de K pneumoniae, parmi lesquels la production de BLSE était prédominante. Cinq types de BLSE ont été identifiés: TEM-, TEM-, TEM -, SHV- et SHV- La plupart des patients ont été traités empiriquement avec un régime à base d’ESC Une réponse favorable au traitement avec un ESC de nonceftazidime a été observée lorsque l’agent pathogène responsable produisait TEM ou TEM-; le traitement par la ceftazidime était associé à l’échec du traitement chez tous les patients Malgré le succès clinique limité, les ESC ne sont actuellement pas recommandés pour le traitement des infections graves causées par les souches productrices de BLSE.

Au cours des dernières décennies, des souches mutantes résistantes aux antibiotiques produisant des β-lactamases à spectre étendu ont émergé parmi les Enterobacteriaceae, principalement Escherichia coli et Klebsiella pneumoniae. L’émergence de telles souches a d’importantes implications cliniques et thérapeutiques. et les enzymes SHV, qui sont présents en% des entérobactéries Les déterminants de résistance aux BLSE sont souvent trouvés sur les plasmides transmissibles, ce qui facilite la dissémination des déterminants vers d’autres organismes Deuxièmement, en l’absence d’un marqueur évident Pour améliorer la détection en laboratoire, le Comité national sur les normes de laboratoire clinique NCCLS recommande actuellement que les laboratoires effectuent un dépistage spécial pour identifier les producteurs possibles de BLSE, en utilisant un CMI de point de rupture de ⩾ μg / mL pour ⩾ des agents antimicrobiens suivants: cefpodox ime, céfotaxime, ceftriaxone, ceftazidime ou aztréonam. Ces tests doivent être suivis d’un test de confirmation dépendant de l’observation d’une susceptibilité accrue au céfotaxime ou à la ceftazidime en présence d’acide clavulanique . Cependant, selon une enquête récente, de nombreux laboratoires de microbiologie Actuellement, on n’utilise pas de méthode de dépistage adéquate pour détecter les organismes producteurs de BLSE. Le problème consiste à choisir des antibiotiques appropriés pour traiter les infections graves dues à ces organismes. Selon le type ou les types de BLSE produits, ces organismes peuvent En outre, les souches peuvent être résistantes à plusieurs autres classes d’antibiotiques Les rapports d’échec du traitement malgré une susceptibilité in vitro apparente ont remis en question l’utilité des CES de céphalosporines à spectre étendu pour le traitement des infections graves dues à ces organismes De nombreuses études ont e été publié décrivant l’épidémiologie, les méthodes de détection en laboratoire et la caractérisation moléculaire des BLSE; Cependant, peu ont présenté des données cliniques suffisantes établissant la relation entre le type BLSE et les résultats du traitement, en particulier avec les CES. Dans cette étude, nous avons évalué des cas d’infection sanguine due à des E. coli présumés productrices de BLSE et K pneumoniae survenant pendant une période Les principaux objectifs de cette étude étaient de caractériser les phénotypes des organismes étudiés, d’évaluer les caractéristiques de performance des tests de dépistage et de confirmation des BLSE, et d’examiner la base moléculaire des résultats du traitement, avec un se concentrer sur les CES

Patients, matériaux et méthodes

Nous avons utilisé des β-lactamases TEM-, TEM-, SHV- et P β-lactamases. L’activité β-lactamase a été détectée par l’utilisation d’une superposition de nitrocefin. Les céphalosporinases de type AmpC ont été identifiées en observant l’inhibition de la β-lactamase lorsqu’une superposition de la concentration d’aztréonam, μg / mL a été appliquée min avant l’application de nitrocefinOMP caractérisation et transfert de résistance Des isolats E coli sélectionnés ont été caractérisés par OMP et transfert de résistance Des membranes cellulaires bactériennes ont été isolées de souches cultivées pendant une nuit dans du bouillon trypticase soja par sonication La suspension a été ensuite centrifugée à, g pendant min à ° C. Les OMP ont été séparées des préparations totales de membranes en solubilisant la membrane interne avec% de Sarkosyl, suivie d’une centrifugation à, g pendant min à ° C. Ces culots ont ensuite été remis en suspension dans% Sarkosyl et centrifugés une seconde fois. La membrane interne a été dissoute facilitant l’extraction de l’insoluble. La membrane externe OMP a été analysée par électrophorèse sur gel de dodécylsulfate de sodium-polyacrylamide et visualisée par coloration au bleu de Coomassie. Des expériences de maturation ont été réalisées avec E.coli CRifR / NAR comme concentration réceptrice de Ceftazidime, μg / mL, concentration en acide nalidixique, μg / mL, et concentration de rifampicine, μg / mL ont été utilisés comme agents de sélection Amplification du PCR et séquençage des produits de PCR pour blaTEM et blaSHV ADN génomique de KP isolé du cas et CE isolé du cas a été digéré avec HindIII et ligaturé dans pACYC digéré par HindIII New England Les biolabs et transformés en E coli DHα et sélectionnés sur agar trypticase soja plus μg / mL de clones d’ampicilline ont été testés pour la présence de l’enzyme SHV désirée par focalisation isoélectrique. Le produit SHV ​​PCR complet a été généré avec l’utilisation de Pfu polymerase Stratagene et les amorces SHVF ‘-GCC TTT ATC GGC CCT CAC TCA-‘ et SHVB ‘-ATG CCG CCG CCA GTC ATA TC-‘ Le produit PCR purifié ts ont été séquencés réactions de PCR par échantillon avec les amorces SHVF, SHVB, SHVF ‘-GCT GGT TTA TCG CCG ATA AG-‘, et SHVB ‘-TCT TAT CGG CGA TAA ACC AGC-‘ Isole EC de cas, EC de cas, et KP de cas ont eu leur plasmide contenant TEM et isolé et transformé en E coli DHα ou HB test E Les bandes ESBL ont été utilisées pour confirmer que les clones résultants étaient des producteurs de BLSE Le gène TEM a été amplifié par PCR avec l’utilisation de Pfu polymérase et les amorces BLAOT ‘- ATG AGT CAA CAT CT CG -‘ et BLAOT ‘- CCA ATG CTT AAT CAG TGA GG -‘ ; il a ensuite été placé dans un vecteur émoussé PCR Des clones d’ADN plasmidique Invitrogen pour chaque enzyme ont été séquences avec les amorces BLAOT, BLAOT, BLAF ‘-ACG TTT TCC AAT GAT GAG CAC T-‘, et BLAB ‘-CGG GAA GCT AGA GTA AGT AGT- Tout le séquençage a été effectué par ACTG, Inc Northbrook, IL, et les analyses ont été effectuées en interne à l’aide de Vector NTI InforMaxAssessment of results Un épisode d’infection sanguine a été défini par l’isolement des souches E coli et K pneumoniae qui avaient un ceftazidime MIC ⩾ μg / mL provenant au moins de l’hémoculture et la présence d’au moins des signes cliniques ou symptômes d’infection suivants: température de> ° C, frissons ou hypotension chez les patients âgés de ⩽ mois: température de> ° C, hypothermie [température & lt; ° C], apnée ou bradycardie L’infection sanguine a été classée comme primaire ou secondaire, et l’acquisition a été classée comme nosocomiale ou communautaire en utilisant une définition de surveillance standard Les résultats cliniques ont été classés comme l’un des réponse complète, réponse partielle, échec, rechute ou non évaluable La réponse complète a été définie comme la résolution de la fièvre, leucocytose et signes locaux d’infection. La réponse partielle a été définie comme une amélioration de la fièvre, leucocytose et signes locaux d’infection sans résolution complète. L’échec a été défini comme l’absence de résolution ou l’aggravation des signes et symptômes d’infection. La rechute a été définie comme une récurrence de l’infection par le même organisme sur tout site du corps dans un mois après l’arrêt du traitement. pour tous les épisodes évaluables de l’infection sanguine selon le type de souche, le régime antimicrobien initial et le type de traitement. Un patient ayant une réponse complète ou partielle au traitement était considéré comme un répondeur, alors que ceux qui ont connu une rechute ont été considérés comme non répondeursStatistiques Les résultats du traitement ont été analysés en fonction du type de souche E coli ou K pneumoniae, régime antimicrobien incluant la céphalosporine ou ne comprenant pas céphalosporine initialement et à la fin du traitement, et type de traitement monothérapie ou polythérapie Comparer les résultats du traitement pour chacun des sous-groupes, ou le test exact de Fisher a été utilisé, selon le cas P & lt; signification statistique indiquée Toutes les analyses ont été effectuées avec le logiciel GraphPad Prism, version pour Windows GraphPad Software

Résultats

Patients et souches bactériennes Un total d’épisodes bactériémiques pour lesquels les tests étaient positifs pour E. coli ou K pneumoniae avec des CMI de ceftazidime de ⩾ μg / mL ont été identifiés dans la base de données de microbiologie informatisée du Centre Médical UCLA pour ces années. Deux patients ont chacun eu des épisodes distincts d’infections sanguines dues à différents organismes. E coli était plus fréquemment isolé chez les patients de l’étude que K pneumoniae par rapport aux patients, respectivement. l’isolat a été conservé pour des épisodes d’infection sanguine; Les isolats d’E. Coli et les isolats de K pneumoniae étaient disponibles pour l’analyse phénotypique et moléculaire. Les caractéristiques des patients sont présentées dans le tableau. La bactériémie était primaire en% d’épisodes et secondaire en épisodes% Pour les patients avec bactériémie secondaire, l’urine était la source la plus fréquente d’infection primaire. La plupart des épisodes [%] ont été classés comme étant nosocomiaux Environ un tiers des patients avaient des antécédents récents d’intervention chirurgicale ou d’exposition à la ceftazidime ⩽ jours avant le premier résultat d’hémocultures positif Au moment où le résultat positif d’hémoculture était obtenu, la plupart des patients ayant des épisodes étaient hospitalisés dans [%] des épisodes d’une unité de soins actifs. Le taux de mortalité brut était% d’épisodes et mortalité attribuable en raison du sepsis était% d’épisodes

Tableau View largeTélécharger slide Caractéristiques démographiques des patients atteints de bactériémie due à Escherichia coli EC et Klebsiella pneumoniae résistant à la ceftazidimeTable View largeTélécharger les caractéristiques démographiques des patients atteints de bactériémie due à Escherichia coli EC et Klebsiella pneumoniaePhenotypic caractéristiques de résistance à la ceftazidime: test de susceptibilité aux antimicrobiensTable résume les résultats de vitro essais de sensibilité aux antimicrobiens d’agents antimicrobiens sélectionnés Aucun des isolats sauvés n’était entièrement sensible à la ticarcilline et à la pipéracilline, à l’exception de la souche qui présentait une concentration inhibitrice de pipéracilline de μg / mL; Cette souche a produit une enzyme AmpC à un faible niveau La combinaison avec le tazobactam a rétabli l’activité de la pipéracilline MIC, ⩽ μg / mL contre% des souches de E. coli, que les souches aient produit des BLSE, mais restauré son activité contre seulement% des souches de K pneumoniae , dont chacun a produit des β-lactamases TEM- et SHV-; Par contre, la combinaison avec l’acide clavulanique a rétabli l’activité de la ticarcilline contre seulement les souches d’E. coli, dont aucune ne produisait de BLSE. Tous les isolats étaient sensibles à l’imipénème et au méropénem à une CMI de ⩽ μg / mL. et à la ciprofloxacine des isolats Toutes les souches, mais étaient résistantes aux données de triméthoprime-sulfaméthoxazole non montrées

Tableau View largeTélécharger slideInsensibilité in vitro d’Escherichia coli EC et de Klebsiella pneumoniae KP isolats sanguins d’épisodes de bactériémieTable Voir grandDownload slideIntensibilité in vitro d’Escherichia coli EC et de Klebsiella pneumoniae KP isolats sanguins d’épisodes de bactériémie

Paragonimiasis pleuropulmonaire sévère des années après l’émigration d’une région d’endémicité